

藥丸劑是藥材細粉或藥材提取物加適宜粘合劑或輔料,制成的球形或類球形的固體制劑,是中成藥古老的劑型之一。PCR的DNA檢測方案正在成為中藥材真偽鑒定的金標準,但是加工后的中藥丸由于成分復雜,包括粘合劑和輔料對PCR反應有抑制作用,導致DNA檢測方法不能有效應用于這個領域。本試劑盒通過自主開發的DNA提取方法,對一些PCR抑制成分進行有效的清洗,從而達到有效的DNA提取純度。提取的DNA可直接用于PCR反應,為藥材的真偽鑒定和摻假檢測提供了一個可靠的檢測方案。
?雜質清洗前處理?:
將丸劑溶解于我司開發的清洗劑A,讓中藥丸在65C的高溫下充分溶解于清洗劑,特別讓膠狀物質也可以溶解。隨后再進一步采用清洗劑B去溶解蛋白質、皂甙和油脂等雜質,讓純凈的動植物組織可通過高速離心得以有效分離。
組織裂解:
將離心所得的沉淀組織通過裂解液進行核酸釋放,同時需要考慮有效去除多糖和苯酚類雜質。同時裂解試劑應避免使用苯、氯仿等有害有機溶劑的核酸提取方法。
磁珠法提取核酸:
磁珠法核酸提取是近期發展迅速的一種新型核酸提取方法。磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在離液鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,能從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出核酸。磁珠法核酸提取不使用傳統方法中的苯、氯仿等有毒試劑,對實驗操作人員的傷害減少到最少,符合現代環保理念。同時,磁珠法因為摒棄了離心步驟,非常適合實現高通量的自動化核酸提取。
洗脫與質檢?:
用TE緩沖液或無菌水洗脫DNA,紫外分光光度計檢測A260/A280比值(1.8-2.0為合格)?。電泳觀察條帶完整性,避免拖尾或彌散?。
注意事項:
操作全程戴手套,避免DNA酶污染?。
深加工食品應加大樣品量到1-5g的提取方案,減少因取樣誤差導致的假陰性結果。
上海睿玥實驗器材有限公司主營產品:全自動熔點測定儀,梯度PCR基因擴增儀,平行反應合成儀
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